Plasmide CRISPR d'Activation (h) CRSP70: sc-402381-ACT

MED26 code CRSP70, une sous-unité essentielle du complexe Mediator qui relie des facteurs de transcription spécifiques de séquence à l’ARN polymérase II et contribue à coordonner l’initiation de la transcription avec son élongation. En mobilisant le module CDK8 et le complexe de super-élongation, MED26 favorise la levée de la pause proximale au promoteur et la régulation dynamique de programmes d’expression génique impliqués dans l’identité cellulaire et les réponses au stress. Une altération de la fonction de Mediator, notamment la dérégulation des réseaux transcriptionnels associés à MED26, est pertinente pour l’étude des troubles du développement et du remodelage transcriptionnel associé au cancer. En tant que régulateur nucléaire de la transcription par l’ARN polymérase II, CRSP70 est fréquemment étudié dans des analyses à l’échelle des voies portant sur la communication enhancer–promoteur, le contrôle génique dépendant de la chromatine et le couplage, spécifique au contexte, entre signalisation et transcription.

CRSP70 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MED26 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CRSP70 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MED26 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MED26, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CRSP70. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MED26 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CRSP70 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CRSP70 dans les cellules tumorales présentant une expression de MED26 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.