Plásmido Doble Nickase (m) CRMP-4: sc-423605-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)CRMP-4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CRMP-4 (m) y el plásmido de doble nickasa CRMP-4 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Dpysl3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CRMP-4 Anticuerpo (LL-5): sc-100323
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) CRMP-4 | sc-423605-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) CRMP-4 | sc-423605-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dpysl3 codifica la proteína mediadora de la respuesta a colapsina 4 (CRMP-4), una fosfoproteína citosólica que conecta señales de guía extracelulares con la remodelación del citoesqueleto intracelular en neuronas. CRMP-4 participa en la señalización de semaforina/neuropilina–plexina y en la regulación posterior de la dinámica de los microtúbulos, el crecimiento axonal y el colapso del cono de crecimiento, mediante un control dependiente de la fosforilación de procesos asociados a tubulina y actina. En tejidos de ratón, la expresión y el estado de modificación de DPYSL3 se han asociado con programas de neurodesarrollo y con la remodelación de neuritas dependiente de la actividad, lo que la hace relevante para estudios sobre la formación de circuitos neuronales y la polaridad neuronal. La desregulación de la señalización de la familia CRMP se ha vinculado a mecanismos implicados en la neurodegeneración y en respuestas a lesiones, lo que respalda su uso como punto de entrada molecular para investigaciones de biología de enfermedades centradas en vías de señalización.
CRMP-4 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Dpysl3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Dpysl3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Dpysl3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Dpysl3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.