Plasmide CRISPR/Cas9 KO CRISP-1 (h): sc-406818

Présentation

CRISP1 code la protéine sécrétée riche en cystéines 1 (CRISP-1), un membre sécrété de la superfamille CAP (cysteine-rich secretory proteins, antigen 5 et pathogenesis-related 1) impliquée dans la physiologie du tractus reproducteur. CRISP-1 est associée à la maturation des spermatozoïdes et à des interactions fonctionnelles à leur surface, influençant des processus liés à la capacitation, à la régulation de la motilité et à l’interaction des gamètes. Grâce à ses domaines conservés riches en cystéines, CRISP-1 peut participer à des interactions extracellulaires protéine–protéine et à la modulation de l’activité des canaux ioniques, décrites pour d’autres membres apparentés de la famille CRISP, ce qui la relie à des événements de signalisation qui façonnent la fonction spermatique. Des altérations de l’expression de CRISP1 ont été étudiées dans le cadre de phénotypes reproducteurs masculins et de profils moléculaires associés à l’infertilité, ce qui étaye son utilisation comme marqueur et comme nœud mécanistique dans les études de biologie de la reproduction.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CRISP-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CRISP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CRISP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CRISP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CRISP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CRISP1 pour l'étude de la signalisation de CRISP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CRISP1 essentiels à la fonction de CRISP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CRISP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CRISP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CRISP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CRISP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CRISP-1 plasmide HDR (h) et le CRISP-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CRISP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CRISP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.