Plasmide Double Nickase (h) CRF-RI: sc-400730-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CRF-RI correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CRF-RI Double Nickase (h) et le plasmide CRF-RI Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CRHR1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CRF-RI | sc-400730-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CRF-RI | sc-400730-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **CRHR1** code le récepteur 1 de l’hormone de libération de la corticotropine (CRF-R1), un RCPG de classe B qui se lie aux peptides CRH pour déclencher une signalisation de réponse au stress. La liaison du ligand active principalement les cascades Gs/adénylate cyclase–AMPc–PKA et peut aussi se coupler à d’autres voies, telles que MAPK/ERK, modulant des programmes transcriptionnels qui régulent la production endocrine, l’excitabilité neuronale et la modulation immunitaire. La signalisation via CRF-R1 s’interface avec l’axe hypothalamo–hypophyso–surrénalien et, plus largement, avec l’homéostasie neuroendocrinienne, reliant l’activité du récepteur à des adaptations cellulaires en situation de stress. Une expression ou une signalisation dérégulée de **CRHR1** a été associée à une réactivité au stress altérée et à des phénotypes neuropsychiatriques, ce qui soutient des études mécanistiques dans des modèles cellulaires neuronaux et périphériques pertinents.
CRF-RI Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRHR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRHR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRHR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRHR1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.