Plasmide Double Nickase (h) CRF: sc-400770-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CRF correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CRF Double Nickase (h) et le plasmide CRF Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CRH. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CRF Antibody (2B11): sc-293187
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CRF | sc-400770-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CRF | sc-400770-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **CRH** code l’hormone de libération de la corticotropine (CRF), un neuropeptide clé qui déclenche la réponse de l’axe hypothalamo–hypophyso–surrénalien (HHS) au stress physiologique et psychologique. La signalisation de la CRF via **CRHR1/CRHR2** active la voie **AMPc/PKA** et, en aval, la transcription régulée par **CREB**, modulant la production endocrine, la fonction autonome et les adaptations comportementales. Au-delà du système nerveux central, **CRH/CRF** peut moduler l’activité immunitaire et la signalisation inflammatoire dans les tissus périphériques. Une dérégulation des voies **CRH–CRF** est impliquée dans des phénotypes neuropsychiatriques liés au stress et dans une altération de l’homéostasie neuroendocrinienne ; ces voies sont étudiées notamment dans les circuits de l’humeur et de l’anxiété, la régulation du sommeil et l’adaptation métabolique.
CRF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRH.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.