CREST CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403134-ACT

SS18L1 (CREST) kodiert einen neuronenspezifisch angereicherten, chromatinassoziierten Faktor, der mit der Transkriptionsregulation und aktivitätsabhängigen Genexpressionsprogrammen verknüpft ist. CREST arbeitet mit der Chromatin-Remodelling-Maschinerie zusammen, einschließlich SWI/SNF-verwandter Komplexe, um Promotor- und Enhancer-Zustände zu modulieren, die neuronale Differenzierung, Neuritenauswuchs und synaptische Funktion beeinflussen. Über diese epigenetischen Mechanismen verknüpft SS18L1 neuronale Signalwege mit langfristigen Veränderungen in Transkriptionsnetzwerken und der zellulären Identität. Eine Fehlregulation CREST-assoziierter Signalwege wurde im Zusammenhang mit krankheitsrelevanten Prozessen bei neurodevelopmentalen und neurodegenerativen Erkrankungen untersucht, darunter eine veränderte synaptische Homöostase und stressresponsive Transkription.

CREST Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SS18L1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CREST Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SS18L1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SS18L1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CREST-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SS18L1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CREST-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CREST-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SS18L1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.