CREM CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400406

概要

CREM（cAMP response element modulator）は、CREB/ATFファミリーに属するbZIP型転写因子で、cAMP応答配列（CRE）に結合して、刺激依存的な遺伝子発現プログラムを制御します。CREMは、cAMP/PKAシグナル伝達をカルシウムやMAPKに連動した入力と統合することで、細胞増殖、分化、ストレス応答に影響する転写応答の方向性を規定します。CREMは内分泌および生殖生物学において特に重要で、精子形成や神経内分泌系遺伝子の発現制御に関与し、またアイソフォーム特異的な活性により、転写活性化と転写抑制のいずれにも作用し得ます。CREMシグナルの異常は、免疫・炎症に関連する転写状態の変化と関連づけられており、内分泌機能障害、不妊に関わる機序、神経精神疾患に関連する経路などの文脈で検討されています。

CREM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCREM遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CREM内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CREMのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CREMタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CREMシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CREM欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CREMの機能に不可欠なCREMエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CREMゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CREM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCREM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CREM遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CREM HDRプラスミド（h）および CREM HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCREMホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCREM標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。