Plasmide CRISPR/Cas9 KO CREM (h): sc-400406

Présentation

CREM (cAMP response element modulator) est un facteur de transcription bZIP de la famille CREB/ATF qui se lie aux éléments de réponse à l’AMPc afin de réguler des programmes d’expression génique dépendants des stimuli. En intégrant la signalisation AMPc/PKA à des entrées liées au calcium et aux MAPK, CREM façonne des réponses transcriptionnelles qui influencent la prolifération cellulaire, la différenciation et les réponses au stress. CREM est particulièrement important en biologie endocrinienne et reproductive, notamment dans la régulation de la spermatogenèse et de l’expression de gènes neuroendocriniens, et l’activité spécifique de ses isoformes peut basculer entre activation et répression transcriptionnelles. Une dérégulation de la signalisation de CREM a été associée à des états transcriptionnels immunitaires et inflammatoires altérés et a été étudiée dans des contextes tels que les dysfonctions endocriniennes, les mécanismes liés à l’infertilité et des voies pertinentes pour les maladies neuropsychiatriques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CREM (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CREM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CREM, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CREM à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CREM.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CREM pour l'étude de la signalisation de CREM, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CREM essentiels à la fonction de CREM
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CREM pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CREM plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CREM plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CREM. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CREM plasmide HDR (h) et le CREM (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CREM pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CREM définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.