Plasmide CRISPR d'Activation (m) CREM: sc-419799-ACT

La protéine murine CREM (cAMP responsive element modulator) est un facteur de transcription bZIP de la famille CREB/ATF qui se fixe aux éléments de réponse à l’AMPc afin de réguler des programmes d’expression génique dépendants des stimuli. En intégrant la signalisation AMPc/PKA, des entrées dépendantes du calcium et des événements de phosphorylation liés aux MAPK, CREM influence la dynamique transcriptionnelle qui façonne la plasticité neuronale, les sorties endocrines et les états d’activation des cellules immunitaires. La diversité des isoformes de CREM, incluant des activateurs et des répresseurs inductibles tels qu’ICER, permet un contrôle spécifique au contexte des réseaux de gènes immédiats précoces et métaboliques. Une activité dérégulée de CREM a été associée, dans des modèles expérimentaux, à des altérations de la physiologie reproductive, de la signalisation sensible au stress et à des pathologies à médiation immunitaire, ce qui en fait un outil pertinent pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel dans des voies impliquées dans les maladies.

CREM Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Crem sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CREM Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Crem dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Crem, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CREM. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Crem natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CREM au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CREM dans les cellules tumorales présentant une expression de Crem silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.