Plasmide CRISPR d'Activation (h) CREB3L1: sc-405316-ACT

CREB3L1 (protéine 3 de type 1 se liant à l’élément de réponse à l’AMPc) est un facteur de transcription bZIP ancré à la membrane, activé par une protéolyse intramembranaire régulée, puis transloqué dans le noyau où il contrôle des programmes d’expression génique liés au stress du réticulum endoplasmique et à l’adaptation de la voie sécrétoire. Il influence la production de matrice extracellulaire ainsi que des réseaux transcriptionnels associés à la différenciation, en intégrant des signaux qui coordonnent la biosynthèse du collagène, les réponses au stress cellulaire et la protéostasie. L’activité de CREB3L1 a été impliquée dans des contextes de remodelage tissulaire altéré et de transitions d’état cellulaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des programmes transcriptionnels de type fibrose et des changements associés aux tumeurs en matière d’invasion, de métastase et de tolérance au stress. En tant que régulateur transcriptionnel, il constitue un nœud exploitable pour disséquer l’articulation entre la signalisation du stress du RE, le remodelage matriciel et l’expression génique spécifique de lignée.

CREB3L1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CREB3L1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CREB3L1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CREB3L1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CREB3L1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CREB3L1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CREB3L1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CREB3L1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CREB3L1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CREB3L1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.