CREB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400160-ACT

CREB1 (proteína de ligação ao elemento responsivo a cAMP 1) é um fator de transcrição específico de sequência que se liga a elementos responsivos a cAMP para coordenar programas de expressão gênica dependentes de estímulos. Atua como um efetor central da sinalização cAMP/PKA e integra entradas de MAPK/ERK e de quinases dependentes de Ca2+/calmodulina por meio do recrutamento de coativadores dependente de fosforilação, incluindo CBP/p300. A transcrição regulada por CREB1 sustenta a plasticidade neuronal e a formação de memória, a homeostase circadiana e metabólica e respostas pró-sobrevivência ao estresse celular. A atividade desregulada de CREB1 e as redes transcricionais dependentes de CREB têm sido implicadas no crescimento oncogênico e na resistência a terapias, em processos neuropsiquiátricos e neurodegenerativos e em contextos de sinalização inflamatória.

CREB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CREB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CREB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CREB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CREB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CREB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CREB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CREB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CREB1 em células tumorais com expressão de CREB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.