Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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creatine kinase-M Double Nickase Plasmid (h): sc-401132-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das creatine kinase-M Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- creatine kinase-M Double-Nickase-Plasmid (h) und creatine kinase-M Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CKM abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: creatine kinase-M: sc-365046
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
creatine kinase-M Double Nickase Plasmid (h) | sc-401132-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
creatine kinase-M Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401132-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CKM kodiert die muskeltypische Kreatinkinase (Kreatinkinase‑M), eine zytosolische Phosphotransferase, die den reversiblen Phosphattransfer zwischen ATP und Kreatin katalysiert, um ATP bei schwankendem Energiebedarf zu puffern und rasch zu regenerieren. Diese Reaktion ist zentral für den Phosphokreatin‑Shuttle und koppelt Glykolyse und oxidative Phosphorylierung an den ATP‑Verbrauch der Myofibrillen; dadurch werden die Muskelkontraktion und eine umfassendere zelluläre Energiehomöostase unterstützt. Die CKM‑Aktivität trägt zum Kreatin-/Phosphagenstoffwechsel bei und wird häufig als biochemischer und molekularer Readout in Studien zur Differenzierung von Skelettmuskelzellen, zu Stressantworten und zur Mitochondrienfunktion genutzt. Eine gestörte Kreatinkinase‑Signalgebung und veränderte CKM‑Expression wurden mit Muskelschädigungen und metabolischen Störungen in Verbindung gebracht, wodurch CKM für mechanistische Untersuchungen von Myopathien und verwandten Phänotypen mit Energiedefizit relevant ist.
creatine kinase-M Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CKM-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CKM abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CKM-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CKM-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.