Plásmido Doble Nickase (h) creatine kinase-M: sc-401132-NIC

CKM codifica la creatina quinasa de tipo muscular (creatina quinasa M), una fosfotransferasa citosólica que cataliza la transferencia reversible de fosfato entre el ATP y la creatina para amortiguar y regenerar rápidamente ATP cuando la demanda energética fluctúa. Esta reacción es central en la lanzadera de fosfocreatina y conecta la glucólisis y la fosforilación oxidativa con el consumo de ATP por las miofibrillas, apoyando la contracción muscular y una homeostasis energética celular más amplia. La actividad de CKM contribuye al metabolismo de la creatina/fosfágenos y se utiliza comúnmente como marcador bioquímico y molecular en estudios de diferenciación del músculo esquelético, respuestas al estrés y función mitocondrial. La desregulación de la señalización de la creatina quinasa y los cambios en la expresión de CKM se han asociado con daño muscular y alteraciones metabólicas, lo que la hace relevante para investigaciones mecanísticas de miopatías y fenotipos relacionados con déficit energético.

creatine kinase-M El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CKM en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CKM. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CKM. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CKM alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.