Plasmide Double Nickase (h) CRBN: sc-412142-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CRBN correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CRBN Double Nickase (h) et le plasmide CRBN Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CRBN. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CRBN | sc-412142-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CRBN | sc-412142-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRBN (cereblon) code un récepteur de substrat du complexe ligase E3 d’ubiquitine CRL4^CRBN, qui relie CUL4A/DDB1 à des protéines cibles spécifiques afin de permettre leur ubiquitination et leur dégradation par le protéasome. En régulant l’homéostasie protéique, CRBN influence la progression du cycle cellulaire, les programmes de différenciation et les voies de signalisation répondant au stress. CRBN est également connu pour son rôle dans le recrutement de substrats dépendant de petites molécules, reliant la dégradation médiée par l’ubiquitine à une biologie pertinente pour la pharmacologie. Des altérations de l’expression ou de la fonction de CRBN ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux ainsi qu’à des modifications de la sensibilité cellulaire aux perturbations de la protéostase, ce qui étaye sa pertinence dans des modèles mécanistiques de maladies.
CRBN Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRBN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRBN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRBN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRBN.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.