Plasmide CRISPR d'Activation (h) CPT1-C: sc-402510-ACT

Le gène humain **CPT1C** code la carnitine palmitoyltransférase 1C (CPT1‑C), un membre atypique de la famille CPT1, particulièrement abondant dans le système nerveux, qui relie le métabolisme lipidique à l’homéostasie énergétique et redox cellulaire. Contrairement aux CPT1A/B mitochondriales, qui stimulent directement la β‑oxydation des acides gras à longue chaîne, CPT1‑C est considérée comme un capteur métabolique influençant la gestion des lipides, les réponses au stress du réticulum endoplasmique (RE) et les voies de signalisation associées à l’AMPK et à mTOR, qui couplent l’état nutritionnel à la fonction neuronale. L’activité de CPT1C a été associée à la régulation de la composition lipidique membranaire et aux réponses adaptatives au stress énergétique, des processus essentiels au maintien des synapses et à la survie neuronale. Des altérations de l’expression de CPT1C ont été rapportées dans des contextes de neurodégénérescence, de stress métabolique et de reprogrammation métabolique des cellules tumorales, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des programmes de signalisation dépendants des lipides.

CPT1-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CPT1C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CPT1-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CPT1C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CPT1C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CPT1-C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CPT1C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CPT1-C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CPT1-C dans les cellules tumorales présentant une expression de CPT1C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.