Plasmide CRISPR/Cas9 KO CPSF4 (h): sc-403190

Présentation

CPSF4 (facteur de spécificité de clivage et de polyadénylation, sous-unité 4) code un composant central de la machinerie de traitement de l’extrémité 3′ des ARNm, qui reconnaît les signaux de polyadénylation et coordonne le clivage ainsi que l’ajout de la queue poly(A). Par son rôle au sein du complexe de clivage et de polyadénylation, CPSF4 contribue à réguler la maturation des transcrits, la polyadénylation alternative et l’expression génique, en influençant la stabilité et la traduction des ARNm. La perturbation des facteurs impliqués dans le traitement de l’extrémité 3′ peut modifier l’utilisation des sites poly(A) et reprogrammer largement les réseaux transcriptionnels, reliant ainsi la biologie associée à CPSF4 au contrôle du cycle cellulaire, aux réponses au stress et aux programmes de différenciation. Un traitement de l’ARN dérégulé et une polyadénylation alternative sont fréquemment observés dans le cancer ainsi que dans d’autres contextes prolifératifs ou neurodéveloppementaux, ce qui fait de CPSF4 un nœud pertinent pour des études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CPSF4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CPSF4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CPSF4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CPSF4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CPSF4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CPSF4 pour l'étude de la signalisation de CPSF4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CPSF4 essentiels à la fonction de CPSF4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CPSF4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CPSF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CPSF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CPSF4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CPSF4 plasmide HDR (h) et le CPSF4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CPSF4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CPSF4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.