Plasmide Double Nickase (h) CPSF1: sc-405273-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CPSF1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CPSF1 Double Nickase (h) et le plasmide CPSF1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CPSF1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CPSF1 Antibody (G-10): sc-166281
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CPSF1 | sc-405273-NIC | 20 µg | $410.00 |
CPSF1 (facteur de spécificité de clivage et de polyadénylation, sous-unité 1) est un composant central de la machinerie de maturation des pré-ARNm à l’extrémité 3′, qui coordonne la reconnaissance des signaux de polyadénylation, le clivage endonucléolytique et l’ajout de la queue poly(A). Par son rôle au sein du complexe CPSF, CPSF1 couple la terminaison de la transcription à la maturation de l’ARN, influençant la stabilité des transcrits, leur export nucléaire et l’efficacité de la traduction. Une perturbation du clivage et de la polyadénylation dépendants de CPSF1 peut modifier l’utilisation des sites de polyadénylation alternatifs et remodeler largement des programmes d’expression génique liés au contrôle du cycle cellulaire, à la différenciation et aux réponses au stress. Une maturation dérégulée de l’extrémité 3′ des ARNm a été associée à des phénotypes prolifératifs et neurodéveloppementaux, faisant de CPSF1 un nœud pertinent pour étudier, dans les cellules humaines, des mécanismes de maladie induits par des altérations du traitement de l’ARN.
CPSF1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CPSF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CPSF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CPSF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CPSF1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.