Plásmido Doble Nickase (h) CPSF1: sc-405273-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CPSF1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CPSF1 (h) y el plásmido de doble nickasa CPSF1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CPSF1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CPSF1 Anticuerpo (G-10): sc-166281
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CPSF1 | sc-405273-NIC | 20 µg | $410.00 |
CPSF1 (factor de especificidad de corte y poliadenilación, subunidad 1) es un componente central de la maquinaria de procesamiento del extremo 3′ del pre-ARNm, que coordina el reconocimiento de las señales de poliadenilación, el corte endonucleolítico y la adición de la cola poli(A). A través de su función en el complejo CPSF, CPSF1 acopla la terminación de la transcripción con la maduración del ARN, modulando la estabilidad del transcrito, la exportación nuclear y la eficiencia de traducción. La alteración del corte y la poliadenilación dependientes de CPSF1 puede cambiar el uso de sitios alternativos de poliadenilación y remodelar de forma amplia programas de expresión génica vinculados al control del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés. La desregulación del procesamiento del extremo 3′ del ARNm se ha asociado con fenotipos proliferativos y del neurodesarrollo, lo que convierte a CPSF1 en un nodo útil para estudiar mecanismos de enfermedad impulsados por el procesamiento de ARN en células humanas.
CPSF1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CPSF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CPSF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CPSF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CPSF1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.