Plasmide Double Nickase (h) CPS2: sc-403519-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CPS2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CPS2 Double Nickase (h) et le plasmide CPS2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CAD. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CPS2 Antibody (F-6): sc-376072
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CPS2 | sc-403519-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CPS2 | sc-403519-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **CAD** code une enzyme cytosolique multifonctionnelle qui catalyse les trois premières étapes engagées de la biosynthèse *de novo* des pyrimidines, le domaine **CPS2** assurant la synthèse de carbamoyl‑phosphate dépendante de la glutamine. En couplant, au sein d’une seule chaîne polypeptidique, l’activité carbamoyl‑phosphate synthétase aux fonctions d’aspartate transcarbamylase et de dihydroorotase, CAD soutient la production de nucléotides nécessaire à la réplication de l’ADN, à la transcription de l’ARN et à la synthèse des phospholipides membranaires. L’activité de CAD est coordonnée avec les signaux prolifératifs et l’état métabolique de la cellule, reliant la disponibilité en pyrimidines à la progression du cycle cellulaire et aux réponses au stress. La dérégulation du métabolisme des pyrimidines et les altérations de la fonction de CAD ont été associées à des phénotypes prolifératifs et à une vulnérabilité métabolique dans des modèles pertinents pour le cancer, faisant de CAD un nœud utile pour l’étude de l’homéostasie des nucléotides.
CPS2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAD.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.