Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CPS1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402014-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CPS1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CPS1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CPS1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CPS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CPS1: sc-376190
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CPS1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402014-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CPS1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402014-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Carbamoylphosphat-Synthase 1 (CPS1) kodiert das mitochondriale Enzym, das den geschwindigkeitsbestimmenden Schritt des Harnstoffzyklus katalysiert, indem es Ammoniak und Bicarbonat in einer ATP-abhängigen Reaktion zu Carbamoylphosphat umsetzt. Indem CPS1 die Stickstoffentsorgung und die Arginin-Biosynthese steuert, verknüpft es den mitochondrialen Stoffwechsel mit hepatozellulären Entgiftungsprozessen sowie mit übergeordneten Netzwerken des Aminosäure- und Nukleotidstoffwechsels. Eine veränderte CPS1-Aktivität ist mit Hyperammonämie und Störungen des Harnstoffzyklus assoziiert, und seine Expression kann bei Stoffwechselerkrankungen und Krebs umprogrammiert werden, um Anpassungen im Stickstoffhaushalt zu unterstützen. Diese Eigenschaften machen CPS1 zu einem relevanten Ziel, um mitochondrialen Stickstofffluss, die Regulation des Harnstoffzyklus und metabolische Umverdrahtung in humanen Zellmodellen zu untersuchen.
CPS1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CPS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CPS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CPS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CPS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.