Plásmido CRISPR de Activación (h) CPS1: sc-402014-ACT

El CPS1 humano codifica la carbamoil‑fosfato sintasa 1, una enzima mitocondrial que cataliza el primer paso comprometido del ciclo de la urea al convertir amoníaco y bicarbonato en carbamoil fosfato utilizando ATP. Esta actividad es fundamental para la eliminación hepática del nitrógeno e interactúa con el catabolismo de aminoácidos, el metabolismo mitocondrial y la biosíntesis posterior de arginina. Las alteraciones en la expresión o la función de CPS1 se asocian con hiperamoniemia y una desregulación metabólica más amplia, y el estado de CPS1 se evalúa con frecuencia en estudios de fisiología hepática, respuestas al estrés mitocondrial y balance de nitrógeno. En investigación oncológica y metabólica, CPS1 también se utiliza como un marcador dependiente del contexto de la reprogramación metabólica y de la actividad del ciclo de la urea asociada al linaje.

CPS1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CPS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CPS1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CPS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CPS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CPS1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CPS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CPS1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CPS1 en células tumorales con expresión de CPS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.