Particules Lentivirales d'Activation (h) CPI-17: sc-401966-LAC

PPP1R14A code pour CPI-17, un inhibiteur de la phosphatase des chaînes légères de la myosine (MLCP/PP1) dépendant de la phosphorylation, qui amplifie la signalisation contractile en maintenant la phosphorylation de la chaîne légère régulatrice de la myosine. Lorsqu’il est activé par la PKC et par des signaux liés à RhoA/ROCK, CPI-17 intègre les voies de sensibilisation au Ca²⁺ afin de moduler le tonus du muscle lisse, la tension du cytosquelette et la dynamique actomyosine. Ce nœud de régulation influence la contractilité induite par les GPCR, la migration cellulaire et les propriétés de barrière dans les tissus vasculaires et viscéraux. Une dérégulation de la signalisation PPP1R14A/CPI-17 a été associée à une hypercontractilité du muscle lisse et à des processus de remodelage, pertinents pour la biologie des maladies cardiovasculaires et des voies aériennes, ce qui en fait une cible mécanistique utile dans les études de signalisation et de physiologie tissulaire.

Les particules d'activation lentivirales CPI-17 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PPP1R14A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CPI-17 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PPP1R14A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CPI-17. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PPP1R14A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.