COX5b Double Nickase Plasmid (h): sc-405159-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COX5b Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COX5b Double-Nickase-Plasmid (h) und COX5b Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COX5B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: COX5b: sc-374416
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COX5b Double Nickase Plasmid (h) | sc-405159-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COX5b Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405159-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COX5B kodiert die Cytochrom-c-Oxidase-Untereinheit 5B (COX5b), eine nukleär kodierte Komponente des mitochondrialen Komplexes IV, die die Elektronenübertragung von Cytochrom c auf Sauerstoff mitreguliert und eine effiziente oxidative Phosphorylierung unterstützt. Durch seinen Beitrag zum Protonentransport und zum Aufbau des mitochondrialen Membranpotenzials beeinflusst COX5b die ATP-Produktion, das Gleichgewicht reaktiver Sauerstoffspezies und die metabolische Anpassung unter wechselnden Sauerstoff- und Nährstoffbedingungen. Die Funktion von COX5B überschneidet sich mit Signalwegen der mitochondrialen Biogenese und Qualitätskontrolle, einschließlich der Assemblierung der Atmungskette und der Mitophagie, die zentral für zelluläre Stressantworten sind. Eine veränderte Komplex-IV-Aktivität und eine mit COX5B assoziierte mitochondriale Dysfunktion wurden mit bioenergetischen Defekten in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, darunter neuromuskuläre und neurodegenerative Phänotypen, bei denen die mitochondriale Leistungsfähigkeit das Zellüberleben und die Differenzierung begrenzt.
COX5b Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COX5B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COX5B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COX5B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COX5B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.