COX4 Double Nickase Plasmid (h): sc-400616-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COX4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COX4 Double-Nickase-Plasmid (h) und COX4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COX4I1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: COX4: sc-376731
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COX4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400616-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COX4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400616-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COX4I1 kodiert die Cytochrom-c-Oxidase‑Untereinheit IV, Isoform 1 (COX4), eine nukleär kodierte regulatorische Komponente des mitochondrialen Komplexes IV, die den Elektronentransfer von Cytochrom c auf Sauerstoff feinabstimmt und das Protonenpumpen für die oxidative Phosphorylierung unterstützt. COX4 verknüpft die mitochondriale Atmung mit der zellulären Energiehomöostase und dem Redoxgleichgewicht und beeinflusst dadurch die ATP‑Produktion, die Signalgebung über reaktive Sauerstoffspezies (ROS) sowie die metabolische Anpassung an Nährstoff- und Sauerstoffverfügbarkeit. Störungen der Komplex‑IV‑Funktion werden mit Phänotypen mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht, darunter beeinträchtigte Bioenergetik und veränderte Stressantworten, und werden häufig in Kontexten wie Neurodegeneration, kardiometabolischer Pathologie und Tumormetabolismus untersucht. COX4I1 ist daher ein nützliches Ziel, um die Kontrolle der mitochondrialen Atmung und deren Kopplung an Programme für Zellüberleben, Proliferation und Differenzierung zu untersuchen.
COX4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COX4I1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COX4I1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COX4I1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COX4I1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.