COX4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400616-ACT

O COX4I1 humano codifica a subunidade IV da citocromo c oxidase, isoforma 1 (COX4), um componente estrutural do complexo IV mitocondrial codificado no núcleo, que ajuda a regular a transferência de elétrons do citocromo c para o oxigênio molecular e dá suporte à fosforilação oxidativa. Ao influenciar a atividade do complexo IV, a COX4 contribui para a manutenção do potencial de membrana mitocondrial, a produção de ATP e a homeostase de espécies reativas de oxigênio, integrando-se a programas mais amplos de bioenergética e resposta ao estresse. A expressão de COX4I1 e a estequiometria do complexo IV são frequentemente avaliadas em estudos de disfunção mitocondrial, adaptação à hipóxia e reprogramação metabólica que acompanham estados de doença proliferativos e degenerativos. Como um marcador central da integridade da cadeia respiratória, a COX4 é comumente utilizada para relacionar alterações na biogênese mitocondrial e na proteostase com mudanças no metabolismo celular.

COX4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COX4I1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

COX4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COX4I1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COX4I1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de COX4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COX4I1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de COX4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via COX4 em células tumorais com expressão de COX4I1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.