COUP-TFI CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403834-ACT

NR2F1 kodiert den verwaisten nukleären Rezeptor COUP-TFI, einen sequenzspezifischen Transkriptionsfaktor, der genregulatorische Programme koordiniert, welche die Neuroentwicklung, die Festlegung von Zellschicksalen und die Differenzierung steuern. COUP-TFI ist mit der Retinsäure-Signalgebung und umfassenderen Netzwerken nukleärer Rezeptoren verknüpft und moduliert den Chromatinzustand sowie transkriptionelle Outputs kontextabhängig. In menschlichen Geweben wird die NR2F1-Aktivität mit neuronaler Musterbildung, Axonführung und der Entwicklung sensorischer Systeme in Verbindung gebracht; eine Dysregulation wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen assoziiert. Sein regulatorischer Einfluss auf Lineage-Commitment und Entwicklungszeitpunkte macht NR2F1 zu einem relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien zur transkriptionellen Kontrolle in neuronalen und anderen Entwicklungssystemen.

COUP-TFI Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NR2F1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

COUP-TFI Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NR2F1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NR2F1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen COUP-TFI-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NR2F1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von COUP-TFI-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des COUP-TFI-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NR2F1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.