Cortactin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400761-ACT

Das humane Gen **CTTN** kodiert Cortactin, ein Src-Substrat und ein F-Aktin-bindendes Gerüstprotein, das die Arp2/3-abhängige Bildung verzweigter Aktinfilamente fördert und dynamische Aktinnetzwerke am Zellkortex stabilisiert. Cortactin koordiniert die Signalübertragung von Rezeptor-Tyrosinkinasen und Kinasen der Src-Familie mit der Umgestaltung des Zytoskeletts durch Interaktionen mit N-WASP, Cofilin und endozytotischen Adapterproteinen und beeinflusst dadurch die Bildung von Lamellipodien, den Turnover fokaler Adhäsionen und den Vesikeltransport. Über diese Prozesse ist CTTN eng mit Zellmigration, invasionsähnlichem Verhalten und Mechanotransduktion verknüpft; eine Dysregulation wurde mit veränderten Motilitätsprogrammen und Phänotypen der Tumorprogression in Verbindung gebracht. Daher wird CTTN häufig in Signalwegen untersucht, die die Aktindynamik, Endozytose und Interaktionen mit der extrazellulären Matrix steuern.

Cortactin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CTTN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Cortactin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CTTN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CTTN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Cortactin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CTTN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Cortactin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Cortactin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CTTN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.