Plasmide CRISPR d'Activation (m) Contactin 3: sc-422111-ACT

Cntn3 code la contactine 3, une molécule d’adhésion cellulaire de la superfamille des immunoglobulines, enrichie dans le système nerveux et ancrée à la membrane par un glycosylphosphatidylinositol (GPI). La contactine 3 contribue à la croissance des neurites, au guidage axonal et à l’organisation des synapses en médiant la reconnaissance cellule–cellule à la surface des neurones et en façonnant la connectivité au cours du développement et de la maturation. Grâce à ses fonctions d’adhésion et d’échafaudage, CNTN3 interagit avec des voies qui régulent l’organisation membranaire, l’assemblage des circuits neuronaux et la plasticité dépendante de l’activité. Des altérations de la signalisation de la famille CNTN ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, faisant de Cntn3 une cible pertinente pour des études mécanistiques du câblage cérébral et de la fonction synaptique dans des modèles murins.

Contactin 3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cntn3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Contactin 3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cntn3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cntn3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Contactin 3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cntn3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Contactin 3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Contactin 3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cntn3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.