connexin 62 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405882

Visão geral

GJA10 codifica a conexina 62, uma subunidade de canais de junção comunicante (gap junction) que se monta em conexons para permitir a troca direta, célula a célula, de iões e pequenos metabolitos. O acoplamento mediado por conexinas promove a sincronização elétrica e metabólica, contribuindo para processos como a homeostase tecidular, a coordenação do ciclo celular e as respostas ao stress celular através de uma permeabilidade juncional regulada. Alterações na expressão de conexinas ou na abertura/fecho (gating) dos canais estão amplamente associadas à perturbação da comunicação entre células, com efeitos a jusante em programas de diferenciação e em redes de sinalização, incluindo a dinâmica do cálcio e vias dependentes de quinases. Como membro da família das conexinas, a conexina 62 constitui um alvo para investigar como a remodelação das junções comunicantes influencia fenótipos relevantes para a doença em células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO connexin 62 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GJA10 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GJA10, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GJA10 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína connexin 62.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GJA10 para a investigação da sinalização de connexin 62, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GJA10 críticos para a função connexin 62
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GJA10 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo connexin 62 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo connexin 62 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GJA10. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo connexin 62 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR connexin 62 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GJA10 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GJA10 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.