Plásmido Doble Nickase (h) connexin 50: sc-404332-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)connexin 50 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa connexin 50 (h) y el plásmido de doble nickasa connexin 50 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GJA8. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: connexin 50 Anticuerpo (B-11): sc-373801
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) connexin 50 | sc-404332-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) connexin 50 | sc-404332-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GJA8 codifica la conexina 50, una proteína de uniones comunicantes (gap junctions) que se ensambla en conexones hexaméricos para mediar el intercambio intercelular de iones y pequeños metabolitos. En el cristalino, la conexina 50 sostiene la comunicación entre células epiteliales y fibras, contribuyendo a la homeostasis del cristalino, su transparencia y la diferenciación coordinada durante el desarrollo. Su actividad se integra con procesos que regulan la permeabilidad de membrana, la señalización de calcio y el mantenimiento del sistema de microcirculación del cristalino que sustenta la fisiología de un tejido avascular. La alteración del acoplamiento dependiente de GJA8 se asocia con cambios en la organización de las fibras del cristalino y fenotipos relacionados con cataratas, lo que lo convierte en un punto de entrada útil para estudiar la biología de las uniones comunicantes en modelos oculares.
connexin 50 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GJA8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GJA8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GJA8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GJA8 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.