connexin 43 Double Nickase Plasmid (h): sc-400241-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das connexin 43 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- connexin 43 Double-Nickase-Plasmid (h) und connexin 43 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GJA1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: connexin 43: sc-271837
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
connexin 43 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400241-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
connexin 43 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400241-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **GJA1** kodiert Connexin 43 (Cx43), ein zentrales Gap-Junction-Protein, das sich zu hexameren Connexonen zusammenlagert und interzelluläre Kanäle bildet, über die Ionen und kleine Metaboliten direkt zwischen Zellen ausgetauscht werden können. Über die gap-junction-vermittelte interzelluläre Kommunikation reguliert Cx43 die elektrische Kopplung, die Kalziumsignalgebung, die Gewebehomöostase und koordinierte Stressantworten und spielt dabei besonders wichtige Rollen in der kardialen Erregungsleitung, der Wundheilung und der Entwicklungsmusterung. Connexin 43 wird dynamisch durch phosphorylierungsabhängigen Transport und Abbau gesteuert und ist dadurch mit Signalwegen verknüpft, an denen u. a. PKC, MAPK/ERK sowie zytoskelettales Remodeling beteiligt sind. Veränderte GJA1-Expression oder Kanal-Funktion wurde mit arrhythmogenen Phänotypen, beeinträchtigter Gewebereparatur sowie krebsassoziierten Veränderungen der Zell-Zell-Kommunikation und Invasion in Verbindung gebracht.
connexin 43 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GJA1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GJA1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GJA1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GJA1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.