Plasmide CRISPR d'Activation (m) connexin 43: sc-420556-ACT

Le gène murin **Gja1** code la **connexine 43 (Cx43)**, une protéine majeure des jonctions communicantes (gap junctions) qui forme des canaux intercellulaires permettant l’échange direct d’ions et de petits métabolites, afin de coordonner l’homéostasie tissulaire. Cx43 régule le couplage électrique et la synchronisation des signaux via les flux de calcium et d’AMPc, influençant la prolifération, la différenciation et les réponses au stress dans de nombreux types cellulaires. Par ses fonctions dans la communication intercellulaire via les jonctions communicantes et l’activité des hémicanaux, la connexine 43 intervient dans la réparation tissulaire, l’inflammation et l’organisation du développement en modulant des voies liées à MAPK, PKC et à la dynamique du cytosquelette. Une expression ou une fonction canalaires dérégulées de Gja1/Cx43 sont associées à une communication cellule-cellule altérée dans des contextes cardiovasculaires et neuro-inflammatoires, ainsi qu’en biologie tumorale et lors du remodelage fibrotique, ce qui en fait une cible fréquente des études mécanistiques.

connexin 43 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gja1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

connexin 43 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gja1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gja1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de connexin 43. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gja1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de connexin 43 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie connexin 43 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gja1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.