Plasmide CRISPR/Cas9 KO connexin 37 (m): sc-420559

Présentation

Le gène murin **Gja4** code la **connexine 37 (Cx37)**, une protéine de jonction communicante qui s’assemble en canaux intercellulaires permettant l’échange direct d’ions et de petits métabolites afin de coordonner l’homéostasie tissulaire. Cx37 contribue à une signalisation dépendante du contact qui module le comportement des cellules endothéliales et des cellules musculaires lisses, avec des rôles dans le développement vasculaire, la régulation de la barrière et la mécanotransduction. Par la communication intercellulaire via les jonctions communicantes, elle influence des processus tels que le contrôle du cycle cellulaire, la migration et la signalisation inflammatoire. Une altération de la fonction de la connexine 37 a été associée à des dysfonctions vasculaires et à des phénotypes pertinents sur le plan cardiovasculaire, ce qui étaye son utilisation dans des modèles d’angiogenèse, de voies liées à la thrombose et de dialogue immuno‑vasculaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO connexin 37 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gja4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gja4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gja4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine connexin 37.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gja4 pour l'étude de la signalisation de connexin 37, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gja4 essentiels à la fonction de connexin 37
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gja4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le connexin 37 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le connexin 37 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gja4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le connexin 37 plasmide HDR (m) et le connexin 37 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gja4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gja4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.