Plásmido CRISPR de Activación (m) connexin 37: sc-420559-ACT

El gen Gja4 de ratón codifica la conexina 37 (Cx37), una subunidad de canal de uniones gap que se ensambla en conexones para mediar la comunicación intercelular directa mediante iones y pequeños metabolitos. El acoplamiento dependiente de Cx37 ayuda a coordinar la función endotelial, el tono vascular y la señalización entre músculo liso y endotelio, e influye en procesos como las respuestas al estrés de cizallamiento, el control del ciclo celular y la homeostasis tisular. En el sistema vascular y linfático, las alteraciones en la señalización mediada por conexinas se han vinculado con angiogénesis desregulada, inflamación y remodelado vascular, lo que convierte a Gja4 en un locus útil para estudiar los mecanismos que subyacen a fenotipos cardiovasculares y linfáticos. Dado que la composición de las uniones gap determina la propagación de señales entre células vecinas, la modulación de Gja4 también es relevante para investigaciones sobre la integridad de la barrera y el control del microambiente sobre el comportamiento celular.

connexin 37 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Gja4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

connexin 37 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Gja4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Gja4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de connexin 37. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Gja4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de connexin 37 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía connexin 37 en células tumorales con expresión de Gja4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.