Plasmide CRISPR d'Activation (m) connexin 37: sc-420559-ACT

Le gène murin **Gja4** code la connexine 37 (Cx37), une sous-unité de canaux des jonctions communicantes qui s’assemble en connexons pour permettre une communication intercellulaire directe via des ions et de petits métabolites. Le couplage dépendant de Cx37 contribue à coordonner la fonction endothéliale, le tonus vasculaire et la signalisation entre muscle lisse et endothélium, influençant des processus tels que les réponses au cisaillement, le contrôle du cycle cellulaire et l’homéostasie tissulaire. Dans le système vasculaire et lymphatique, des altérations de la signalisation médiée par les connexines ont été associées à une angiogenèse dérégulée, à l’inflammation et au remodelage vasculaire, faisant de **Gja4** un locus utile pour étudier les mécanismes à l’origine de phénotypes cardiovasculaires et lymphatiques. Comme la composition des jonctions communicantes façonne la propagation des signaux entre cellules voisines, la modulation de **Gja4** est également pertinente pour des études sur l’intégrité des barrières et le contrôle, par le microenvironnement, du comportement cellulaire.

connexin 37 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gja4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

connexin 37 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gja4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gja4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de connexin 37. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gja4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de connexin 37 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie connexin 37 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gja4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.