connexin 30.3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-409363-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- connexin 30.3O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase connexin 30.3 (h) e o Plasmídeo Double Nickase connexin 30.3 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GJB4. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:connexin 30.3 Anticorpo (F6): sc-81802
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
connexin 30.3 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-409363-NIC | 20 µg | $410.00 |
GJB4 codifica a conexina 30.3, uma subunidade de canais de junções comunicantes (gap junctions) que se monta em conexons para mediar a troca intercelular direta de íons e pequenos metabólitos. Por meio dessas junções, a conexina 30.3 contribui para a coordenação, em nível tecidual, do potencial de membrana, da sinalização de cálcio e do acoplamento metabólico, sustentando a diferenciação e a homeostase epiteliais. Na epiderme, a comunicação mediada por conexinas interage com vias relacionadas à proliferação de queratinócitos e à manutenção da barreira cutânea. A desregulação da função de GJB4 e alterações na conectividade das junções comunicantes têm sido associadas a doenças hereditárias da pele caracterizadas por cornificação aberrante e integridade epitelial comprometida.
connexin 30.3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GJB4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GJB4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GJB4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GJB4 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.