Plasmide Double Nickase (h) COL8A1: sc-405174-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) COL8A1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide COL8A1 Double Nickase (h) et le plasmide COL8A1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant COL8A1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) COL8A1 | sc-405174-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) COL8A1 | sc-405174-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL8A1 code la chaîne alpha 1 du collagène de type VIII, un collagène non fibrillaire à chaîne courte, enrichi dans des matrices extracellulaires spécialisées telles que l’endothélium cornéen et les régions associées à la membrane basale vasculaire. COL8A1 contribue à l’assemblage de la matrice, à l’adhérence cellule–matrice et à la biomécanique tissulaire, en influençant le dialogue de signalisation entre la matrice extracellulaire et les voies intracellulaires qui régulent la migration, la prolifération et la différenciation. Une expression altérée de COL8A1 ou des modifications de son dépôt matriciel ont été associées à une dysfonction endothéliale et à des processus de remodelage pertinents pour la physiologie oculaire et les pathologies vasculaires, ce qui en fait une cible utile pour étudier l’homéostasie de la matrice extracellulaire et la mécanotransduction. Des modèles in vitro et in vivo perturbant COL8A1 permettent d’examiner les changements de comportement cellulaire induits par la matrice, les propriétés de barrière et les réponses au stress.
COL8A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL8A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL8A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL8A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL8A1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.