Plasmide CRISPR/Cas9 KO COL8A1 (m): sc-419753

Présentation

Col8a1 code le collagène de type VIII chaîne alpha 1 (COL8A1), un collagène non fibrillaire de la matrice extracellulaire, enrichi dans les matrices associées à la membrane basale et les tissus conjonctifs liés au compartiment vasculaire. COL8A1 contribue à l’assemblage de la matrice, à l’adhérence cellule–matrice et à la régulation de comportements cellulaires tels que la migration et la prolifération, via des interactions avec les intégrines et des réseaux de remodelage impliquant l’activité des MMP. Dans les modèles murins, les modifications de l’expression de Col8a1 et le dépôt de collagène VIII sont fréquemment étudiés dans des contextes de remodelage vasculaire, d’accumulation de matrice fibrotique et de réorganisation de la matrice extracellulaire associée à la cicatrisation. Ces processus recoupent des programmes sensibles au TGF-β et des voies plus larges de la matrice extracellulaire qui façonnent l’architecture tissulaire et les microenvironnements inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COL8A1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Col8a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Col8a1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Col8a1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COL8A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Col8a1 pour l'étude de la signalisation de COL8A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Col8a1 essentiels à la fonction de COL8A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Col8a1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COL8A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le COL8A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Col8a1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COL8A1 plasmide HDR (m) et le COL8A1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Col8a1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Col8a1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.