Plasmide Double Nickase (h) COL6A3: sc-402899-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) COL6A3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide COL6A3 Double Nickase (h) et le plasmide COL6A3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant COL6A3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: COL6A3 Antibody (A-5): sc-515335
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) COL6A3 | sc-402899-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) COL6A3 | sc-402899-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **COL6A3** code la chaîne α3 du collagène de type VI, un composant clé de la matrice extracellulaire qui s’assemble en réseaux microfibrillaires soutenant la résistance à la traction des tissus et la mécanotransduction. COL6A3 contribue à l’adhérence cellule–matrice, à l’organisation de la matrice et au dialogue avec les voies de signalisation liées aux intégrines et au TGF-β, qui influencent l’activation des fibroblastes, la myogenèse et le remodelage stromal. Une expression altérée de COL6A3 ou des modifications de son dépôt matriciel sont associées à des phénotypes du tissu conjonctif et neuromusculaires, et ce gène est fréquemment étudié en biologie de la fibrose et du microenvironnement tumoral, où la composition de la matrice extracellulaire façonne la migration et la différenciation cellulaires. En tant que gène matriciel fortement dépendant du contexte, COL6A3 est couramment analysé dans des systèmes de culture 3D, d’organoïdes et de co-culture afin de disséquer les changements de comportement cellulaire induits par la matrice extracellulaire.
COL6A3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL6A3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL6A3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL6A3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL6A3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.