Plasmide Double Nickase (h) COL6A2: sc-403209-NIC

COL6A2 code la chaîne α2 du collagène de type VI, un composant clé de la matrice extracellulaire qui s’assemble avec COL6A1 et COL6A3 en réseaux microfibrillaires entourant de nombreux types cellulaires. Cette matrice de collagène VI soutient l’architecture tissulaire, l’adhérence cellule–matrice et la mécanotransduction, modulant des processus tels que la myogenèse, le comportement des fibroblastes et le remodelage de la matrice extracellulaire. La fonction de COL6A2 interfère avec les voies de signalisation associées aux intégrines et au dystroglycane et influence des réponses de survie et de stress dépendantes de la matrice. Des variants pathogènes de COL6A2 sont associés aux myopathies liées au collagène VI, notamment la dystrophie musculaire congénitale d’Ullrich et la myopathie de Bethlem, ce qui en fait une cible fréquente dans les études sur l’intégrité musculaire et la dysfonction de la matrice extracellulaire.

COL6A2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL6A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL6A2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL6A2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL6A2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.