Plasmide CRISPR/Cas9 KO COL6A2 (h): sc-403209

Présentation

COL6A2 code la chaîne α2 du collagène VI, un composant microfibrillaire de la matrice extracellulaire (MEC) qui s’assemble avec COL6A1 et COL6A3 pour former des filaments perlés dans les tissus conjonctifs. Le collagène VI contribue à l’organisation de la MEC, à l’adhérence cellule–matrice et à la mécanotransduction, en influençant l’architecture du cytosquelette et des voies de signalisation telles que les programmes de remodelage associés à l’intégrine/FAK, aux MAPK et au TGF-β. Par ces processus, COL6A2 participe à la régulation de l’intégrité tissulaire et des réponses au stress cellulaire dans les fibroblastes, les myocytes et d’autres types de cellules stromales. Une perturbation pathogène de l’assemblage du collagène VI est associée à des maladies neuromusculaires et du tissu conjonctif héréditaires, faisant de COL6A2 une cible pertinente pour modéliser des phénotypes induits par la MEC.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COL6A2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COL6A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COL6A2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COL6A2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COL6A2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COL6A2 pour l'étude de la signalisation de COL6A2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COL6A2 essentiels à la fonction de COL6A2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COL6A2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COL6A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COL6A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COL6A2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COL6A2 plasmide HDR (h) et le COL6A2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COL6A2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COL6A2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.