Plasmide CRISPR d'Activation (h) COL6A2: sc-403209-ACT

COL6A2 code la chaîne α2 du collagène de type VI, une protéine de la matrice extracellulaire qui s’assemble en microfibrilles perlées et contribue à l’organisation de la matrice péricellulaire dans les tissus conjonctifs. Par ses interactions avec d’autres collagènes, des protéoglycanes et des récepteurs de surface cellulaire, COL6A2 participe au remodelage de la matrice, à l’adhérence cellulaire et à la mécanotransduction, qui influencent les programmes de survie et de différenciation. Sa fonction recoupe la signalisation matrice extracellulaire–récepteur et la régulation du cytosquelette, façonnant des processus tels que la fibrose, l’intégrité tissulaire et l’organisation du stroma. Une expression ou un dépôt matriciel de COL6A2 altérés sont associés à la biologie des maladies du tissu conjonctif et des affections neuromusculaires, et COL6A2 est fréquemment étudié dans les contextes de remodelage du microenvironnement tumoral et des voies fibrosantes.

COL6A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COL6A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

COL6A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COL6A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COL6A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de COL6A2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COL6A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de COL6A2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie COL6A2 dans les cellules tumorales présentant une expression de COL6A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.