COL6A1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401069-ACT

COL6A1 kodiert die Alpha-1-Kette des Kollagens Typ VI, eine zentrale Komponente des mikrofibrillären Kollagen-VI-Netzwerks, das bei der Organisation der extrazellulären Matrix hilft und die Zell-Matrix-Adhäsion sowie die mechanische Stabilität von Geweben unterstützt. Kollagen-VI-Assemblierungen interagieren mit anderen Matrixproteinen und beeinflussen dadurch die Architektur der Basalmembran, integrinvermittelte Signalwege und Prozesse wie Fibroblastenaktivierung, Myogenese und wundassoziiertes Remodeling. Eine veränderte COL6A1-Expression oder pathogene Varianten stehen im Zusammenhang mit Kollagen-VI-assoziierten Myopathien und Bindegewebsphänotypen; zudem ist eine dysregulierte Matrixablagerung häufig an fibrotischen sowie tumorassoziierten stromalen Programmen beteiligt. Daher wird COL6A1 breit in Signalwegen untersucht, die die Organisation der extrazellulären Matrix, Mechanotransduktion und das Zellüberleben unter Stress steuern.

COL6A1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen COL6A1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

COL6A1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des COL6A1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der COL6A1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen COL6A1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native COL6A1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von COL6A1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des COL6A1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem COL6A1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.