Plásmido Doble Nickase (h) COL4A1: sc-401792-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)COL4A1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa COL4A1 (h) y el plásmido de doble nickasa COL4A1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a COL4A1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: COL4A1 Anticuerpo (5E10): sc-517572
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) COL4A1 | sc-401792-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) COL4A1 | sc-401792-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL4A1 codifica la cadena alfa-1 del colágeno tipo IV, un componente estructural central de las membranas basales que, junto con COL4A2, se ensambla en redes de colágeno IV para sostener la integridad tisular y la estabilidad microvascular. Este andamiaje de matriz extracelular ayuda a organizar las interacciones célula–matriz que determinan la polaridad epitelial y endotelial, regulan la permeabilidad e influyen en la mecanotransducción mediante señalización asociada a integrinas. La función de COL4A1 se relaciona con el ensamblaje de la membrana basal, la organización de la matriz extracelular y programas angiogénicos que afectan la maduración vascular y la homeostasis tisular. La desregulación o las variantes patogénicas en COL4A1 se asocian con patología de pequeños vasos y defectos multisistémicos de la membrana basal, por lo que constituye un objetivo relevante para estudiar la biología vascular, la función de barrera y los fenotipos celulares dependientes de la matriz.
COL4A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus COL4A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de COL4A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de COL4A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con COL4A1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.