Plasmide Double Nickase (h) COL1A1: sc-400064-NIC

COL1A1 code la chaîne pro‑α1 du collagène de type I, un composant structurel majeur de la matrice extracellulaire qui s'assemble en collagène fibrillaire et confère une résistance à la traction aux tissus conjonctifs. Sa biosynthèse et sa maturation impliquent un traitement dans le réticulum endoplasmique (RE), l'hydroxylation de la proline et de la lysine, la formation de la triple hélice, la sécrétion et la fibrillogenèse extracellulaire, reliant COL1A1 aux voies d'organisation de la MEC, d'adhésion cellule–matrice et de remodelage tissulaire. L'expression de COL1A1 est étroitement couplée aux programmes d'activation des fibroblastes et à des signaux tels que le TGF‑β, qui coordonnent le dépôt de matrice et la réparation des plaies. Des perturbations génétiques ou régulatrices de COL1A1 sont associées à des phénotypes du tissu conjonctif et du squelette, et ce gène est largement étudié dans le contexte de la fibrose et du remodelage du microenvironnement tumoral.

COL1A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL1A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL1A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL1A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL1A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.