Plasmide CRISPR/Cas9 KO COL15A1 (h): sc-404027

Présentation

COL15A1 code la chaîne alpha 1 du collagène de type XV, un collagène non fibrillaire localisé dans la membrane basale et la matrice extracellulaire péricellulaire, où il soutient l’architecture tissulaire et la communication cellule–matrice. En contribuant à l’assemblage et au remodelage de la matrice extracellulaire, COL15A1 influence des programmes d’adhésion, de migration et de mécanotransduction qui recoupent la signalisation intégrines/FAK et la disponibilité de facteurs de croissance régulée par la matrice. Une expression altérée de COL15A1 est associée à des modifications de l’organisation stromale, du comportement de la niche angiogénique et de phénotypes invasifs observés dans de multiples contextes pathologiques, notamment en biologie du cancer et dans des pathologies vasculaires. En tant que composant de la matrice extracellulaire, COL15A1 est fréquemment étudié pour son rôle dans la régulation, par le microenvironnement, du comportement des cellules épithéliales et endothéliales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COL15A1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COL15A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COL15A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COL15A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COL15A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COL15A1 pour l'étude de la signalisation de COL15A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COL15A1 essentiels à la fonction de COL15A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COL15A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COL15A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COL15A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COL15A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COL15A1 plasmide HDR (h) et le COL15A1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COL15A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COL15A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.