Plasmide CRISPR d'Activation (h) COL15A1: sc-404027-ACT

COL15A1 code la chaîne alpha 1 du collagène de type XV, un collagène non fibrillaire associé à la membrane basale qui contribue à l’organisation de la matrice extracellulaire et à l’intégrité structurelle des tissus. Il influence l’adhérence cellule–matrice, la migration et la mécanotransduction en façonnant le microenvironnement périvasculaire et interstitiel et en modulant la signalisation liée aux intégrines et aux adhésions focales. L’expression de COL15A1 est associée à l’homéostasie vasculaire et au remodelage du stroma, ce qui le rend pertinent pour les études sur l’angiogenèse, la fibrose et la régulation du microenvironnement tumoral. Une dérégulation de COL15A1 a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques où la composition de la membrane basale et le remodelage de la matrice sont altérés.

COL15A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COL15A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

COL15A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COL15A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COL15A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de COL15A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COL15A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de COL15A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie COL15A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de COL15A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.