Plasmide Double Nickase (h) COL12A1: sc-402361-NIC

Le gène humain **COL12A1** code la chaîne alpha 1 du collagène de type XII, un collagène associé aux fibrilles qui se localise dans la matrice extracellulaire et interagit avec les fibrilles contenant du collagène I afin de réguler l’architecture de la matrice, ses propriétés de résistance à la traction et la communication cellule–matrice. Par ses rôles dans la fibrillogenèse du collagène, l’organisation tissulaire et la mécanotransduction, **COL12A1** contribue au couplage avec le cytosquelette et à des voies de signalisation qui modèlent les programmes d’adhésion et de migration. Une expression ou une fonction altérée de **COL12A1** a été associée à des maladies héréditaires du tissu conjonctif et à des phénotypes affectant l’intégrité musculaire et squelettique, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du remodelage matriciel et de la biologie du développement. En recherche sur le cancer et la fibrose, **COL12A1** est fréquemment examiné au sein de signatures stromales de matrice extracellulaire associées à des modifications de la rigidité tissulaire et du comportement invasif.

COL12A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL12A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL12A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL12A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL12A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.