Plasmide CRISPR/Cas9 KO COL12A1 (h): sc-402361

Présentation

COL12A1 code la chaîne alpha 1 du collagène de type XII, un collagène associé aux fibrilles à triple hélice interrompue (FACIT) qui se localise dans la matrice extracellulaire et s’associe aux fibrilles de collagène de type I. En reliant les collagènes fibrillaires à d’autres composants de la matrice, COL12A1 contribue à la résistance à la traction des tissus, à la mécanotransduction et à l’organisation de la matrice péricellulaire, influençant l’adhésion et la migration cellulaires. Sa fonction est étroitement liée aux voies de remodelage de la matrice extracellulaire et à la signalisation médiée par les intégrines qui façonnent l’architecture stromale au cours du développement et de la réparation. Des altérations de l’expression de COL12A1 ou des variants ont été impliqués dans des phénotypes héréditaires du tissu conjonctif et des dysfonctionnements musculo-squelettiques, ce qui en fait une cible utile pour étudier les mécanismes pathologiques liés à la matrice.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COL12A1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COL12A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COL12A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COL12A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COL12A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COL12A1 pour l'étude de la signalisation de COL12A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COL12A1 essentiels à la fonction de COL12A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COL12A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COL12A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COL12A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COL12A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COL12A1 plasmide HDR (h) et le COL12A1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COL12A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COL12A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.