Plasmide CRISPR/Cas9 KO COL11A2 (h): sc-406243

Présentation

COL11A2 code la chaîne α2 du collagène de type XI, un collagène fibrillaire quantitativement minoritaire mais structurellement important, qui s’intègre au collagène de type II pour réguler le diamètre des fibrilles de collagène et l’organisation de la matrice extracellulaire, en particulier dans le cartilage. Son expression favorise la différenciation des chondrocytes, la biomécanique des tissus et l’assemblage de la matrice au cours du développement squelettique, en influençant des processus tels que la fibrillogenèse du collagène et la formation de la matrice péricellulaire. Des altérations de COL11A2 ont été associées à des dysplasies squelettiques héréditaires et à une surdité neurosensorielle, ce qui reflète ses rôles dans l’intégrité du cartilage et l’architecture de la matrice extracellulaire de l’oreille interne. En tant que gène de la matrice, COL11A2 est également utilisé pour étudier la signalisation dépendante de la MEC et les interactions cellule–matrice qui modulent le phénotype cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COL11A2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COL11A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COL11A2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COL11A2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COL11A2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COL11A2 pour l'étude de la signalisation de COL11A2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COL11A2 essentiels à la fonction de COL11A2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COL11A2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COL11A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COL11A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COL11A2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COL11A2 plasmide HDR (h) et le COL11A2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COL11A2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COL11A2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.