COL11A2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406243

Panoramica

COL11A2 codifica la catena α2 del collagene di tipo XI, un collagene fibrillare quantitativamente minoritario ma strutturalmente importante, che si integra con il collagene di tipo II per regolare il diametro delle fibrille collagene e l’organizzazione della matrice extracellulare, in particolare nella cartilagine. La sua espressione supporta la differenziazione dei condrociti, la biomeccanica tissutale e l’assemblaggio della matrice durante lo sviluppo scheletrico, influenzando processi quali la fibrillogenesi del collagene e la formazione della matrice pericellulare. Alterazioni di COL11A2 sono state associate a displasie scheletriche ereditarie e a ipoacusia neurosensoriale, a testimonianza del suo ruolo nell’integrità della cartilagine e nell’architettura della matrice extracellulare dell’orecchio interno. In quanto gene della matrice, COL11A2 viene anche utilizzato per studiare la segnalazione dipendente dalla ECM e le interazioni cellula–matrice che modulano il fenotipo cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COL11A2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COL11A2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COL11A2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COL11A2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COL11A2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COL11A2 per lo studio della segnalazione di COL11A2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COL11A2 critici per la funzione di COL11A2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COL11A2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COL11A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COL11A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COL11A2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COL11A2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COL11A2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COL11A2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COL11A2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.