Plasmide CRISPR d'Activation (h) COL10A1: sc-401960-ACT

COL10A1 code le collagène de type X chaîne alpha 1, un collagène à chaîne courte exprimé principalement par les chondrocytes hypertrophiques au cours de l’ossification endochondrale. Il contribue à l’organisation de la matrice extracellulaire et à la transition du cartilage vers l’os en modulant la matrice péricellulaire et en favorisant le remodelage associé à la minéralisation. L’expression de COL10A1 est étroitement liée aux programmes de différenciation des chondrocytes, régulés par des voies telles que la signalisation TGF-β/BMP, le contrôle transcriptionnel dépendant de RUNX2 et les processus de renouvellement de la matrice. Une dérégulation de COL10A1 est associée à des troubles du développement squelettique, dont la chondrodysplasie métaphysaire de Schmid, et elle est également observée dans des contextes de remodelage pathologique de la matrice pertinents pour la recherche sur l’os et le cartilage.

COL10A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COL10A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

COL10A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COL10A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COL10A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de COL10A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COL10A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de COL10A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie COL10A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de COL10A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.