Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cochlin (h): sc-405944

Présentation

COCH code la cochline, une protéine sécrétée de la matrice extracellulaire fortement enrichie dans l’oreille interne, où elle contribue à l’organisation structurelle et à l’homéostasie mécanique des tissus auditifs et vestibulaires. La cochline contient des domaines LCCL et de type facteur von Willebrand A, qui favorisent les interactions avec la matrice et peuvent influencer la signalisation cellule–matrice, le remodelage tissulaire et les réponses inflammatoires. Une altération de la fonction de COCH est liée à des troubles héréditaires de l’audition et de l’équilibre, et des dépôts de cochline ont été associés à des changements dégénératifs dans la cochlée et l’appareil vestibulaire. En tant que protéine associée à la matrice, la cochline est étudiée dans des voies régissant l’assemblage de la matrice extracellulaire, la mécanotransduction et les réponses au stress dans les épithéliums sensoriels.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cochlin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COCH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COCH, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COCH à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cochlin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COCH pour l'étude de la signalisation de Cochlin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COCH essentiels à la fonction de Cochlin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COCH pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cochlin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Cochlin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COCH. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cochlin plasmide HDR (h) et le Cochlin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COCH pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COCH définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.