Plasmide Double Nickase (h) CNTFRα: sc-402322-NIC

Le récepteur alpha du facteur neurotrophique ciliaire (CNTFRα), codé par le gène CNTFR, est une sous-unité de récepteur ancrée à la membrane via un glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui confère la spécificité de liaison au ligand au sein du complexe récepteur du CNTF. Lors de la liaison du CNTF, CNTFRα coopère avec LIFR et gp130 pour initier la signalisation JAK/STAT, avec un couplage supplémentaire aux voies MAPK/ERK et PI3K/AKT, qui régulent la survie neuronale, la différenciation et la biologie gliale. L’activité de la voie CNTFR est largement étudiée dans le contexte du neurodéveloppement et de la neurodégénérescence, où des modifications de l’expression du récepteur ou de l’intensité de la signalisation peuvent influencer le maintien des neurones et la réponse aux lésions. La dérégulation de la signalisation de l’axe CNTF/CNTFR a été associée à des phénotypes cellulaires pertinents pour la maladie dans des modèles de troubles des motoneurones et de la rétine, ce qui soutient des investigations mécanistiques dans des systèmes cellulaires humains.

CNTFRα Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CNTFR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CNTFR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CNTFR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CNTFR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.