Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CNT1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404790-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CNT1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CNT1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CNT1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC28A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CNT1: sc-515874
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CNT1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404790-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CNT1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404790-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC28A1 kodiert den konzentrativen Nukleosidtransporter 1 (CNT1), einen hochaffinen, natriumabhängigen Transporter, der die zelluläre Aufnahme von Pyrimidin-Nukleosiden wie Uridin und Cytidin über die Plasmamembran vermittelt. Durch die Kontrolle des Nukleosid-Salvagewegs beeinflusst CNT1 die Homöostase der Nukleotidpools und unterstützt die DNA-/RNA-Synthese, wodurch Membrantransport mit Replikation, Reparatur und Zellzyklusprogression verknüpft wird. Die CNT1-Aktivität greift in umfassendere Stoffwechselprogramme ein, die die de-novo-Nukleotidbiosynthese und den Salvageweg ausbalancieren; eine veränderte Expression wurde in mehreren Gewebekontexten mit Änderungen der epithelialen Differenzierung und der proliferativen Kapazität in Verbindung gebracht. Daher wird SLC28A1 häufig in der Nukleosidtransport-Biologie, bei metabolischen Stressantworten und in Mechanismen untersucht, die in krankheitsrelevanten Modellen die Sensitivität gegenüber der Verfügbarkeit von Nukleosiden modulieren.
CNT1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC28A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC28A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC28A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC28A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.